鉴定具有人乳铁蛋白的转基因克隆乳制山羊和肺中印迹基因IGF2R的甲基化状态

奶制山羊是使用体细胞核转移（SCNT）在牛奶中生产转基因蛋白的好模型。然而，SCNT产生的动物通常与肺部缺陷有关。最近，我们生产了六只具有人乳铁蛋白基因的转基因克隆乳制山羊，其中包括三个活的转基因克隆和三个死者的转基因克隆，这些克隆在围产期期间因呼吸衰竭而死亡。印迹基因是肺部生长的重要调节因子，可能会经过错误的重编程。在本研究中，进行了首先进行的微卫星分析，PCR和DNA序列鉴定，以确认这三个死去的孩子在遗传上与转基因供体细胞相同。其次，印迹胰岛素样生长因子受体的CpG岛甲基化谱（IGF2R）在三个死去的转基因孩子的肺中评估了基因，并使用Bisulfite测序PCR评估了基因。另外，相对mRNA水平IGF2R也由实时PCR确定。结果表明IGF2R死者克隆儿童肺中的基因表现出异常的高甲基化和更高的mRNA表达水平，这表明异常的DNA甲基化重编程是转基因克隆动物死亡的重要因素之一。